Главная Азбука вейпинга

Определение фагоцитарной активности лейкоцитов. Фагоцитоз и определение фагоцитарной активности

26.06.2020

Панариций, одно из наиболее часто встречающихся заболеваний, которое поражает ткани пальцев рук и ног. Гнойный процесс, вызывающий временную потерю трудоспособности, при неправильном и несвоевременном лечении приводит к нарушению функции конечности и инвалидности.

Что такое панариций? Причины его возникновения?

Панариций – это острый гнойный патологический процесс, возникающий вследствие повреждения тканей пальцев рук и, реже пальцев ног или действия патогенного микроорганизма.

Чаще заболеванию подвержены дети. Ребенок прикасается руками с еще нежной кожей к множеству предметов, часто травмируется, грызет ногти. Несоблюдение правил гигиены, и физическая активность способствуют повреждению рук и их инфицированию.

Кожа пальцев связана с сухожильной пластинкой ладони эластичными волокнами в виде ячеек. Они наполнены жировой тканью, и воспалительный процесс растекается не по плоскости, а вглубь, затрагивая сухожилия, суставы, кости.

Причины, приводящие к панарицию:

Всякие повреждения кожных покровов – ссадины, уколы, царапины, раны, занозы, неаккуратно срезанные заусенцы – служат входными воротами для проникновения инфекции.

Причинами могут послужить:

  • заболевания: вросший ноготь, сахарный диабет, грибок стопы;
  • воздействие химических веществ;
  • переохлаждение или ожог;
  • загрязнение кожных покровов.

Вследствие этих причин на определенных участках нарушается кровообращение, ухудшается питание тканей, снижается местный иммунитет.

В травмированные ладонно-поверхностные ткани пальцев проникают стафило- или стрептококки, кишечная палочка или другие микроорганизмы (в редких случаях микрофлора бывает смешанной), вызывая гнойное воспаление.

Виды панариция

  1. Кожный. Образуется внутрикожное нагноение. Легкая стадия.
  2. Околоногтевой (паронихия). Околоногтевое воспаление.
  3. Подногтевой. Воспаление поражает область под ногтем.
  4. Подкожный. Очаг воспаления расположен в подкожной ладонной клетчатке пальцев.
  5. Костный. Воспалительный процесс затрагивает костную ткань.
  6. Суставной. В процесс вовлекаются пястно- и межфаланговые суставы.
  7. Костно-суставной. Как осложнение суставного, процесс переходит на кости и суставы фаланг.
  8. Сухожильный. Воспаление поражает сухожилия.
  9. Герпетический. Причиной заражения является вирус герпеса. Может не проявляться длительное время, потом появляются пузырь, боль и полостные везикулы.

Панариций пальца на руке или ноге: симптомы и признаки

Проявления заболевания могут отличаться, в зависимости от вида. Общими являются:

  • боль;
  • гиперемия;
  • припухлость;
  • отек всего пальца, фаланги;
  • местное повышение температуры;
  • чувство распирания и пульсации;
  • снижение двигательной функции;
  • на участке воспаления организуется пузырек с гнойным содержимым, иногда с примесью крови;
  • в тяжелых случаях присоединяются общие симптомы интоксикации: головная боль, недомогание, повышение температуры тела, тошнота, головокружение.

Особенности заболевания ног

Болезнь на ногах может развиться в результате ношения тесной неудобной обуви, когда происходит постоянное трение, и образуются микротравмы.

Панариций пальцев ног мало отличается от воспалительного процесса на пальцах рук. Признаки и симптомы заболевания одинаковы. Различия связаны с более слабой чувствительностью пальцев ног за счет меньшего количества нервных окончаний.

Это приводит к тому, что на воспалительный участок не обращается должного внимания. Кожные повреждения своевременно не обрабатываются антисептическим раствором, что является причиной осложнений.

Лечение панариция в домашних условиях

Когда процесс не запущен, лечение будет быстрым и эффективным. Допускается использование компрессов, ванночек и аппликаций.

Ни в коем случае нельзя греть воспаленный участок. Тепло создает среду, в которой быстро размножаются патогенные микроорганизмы, и воспаление распространится на окружающие ткани.

Подкожный панариций

Лечение дома, народными способами можно проводить только на ранней стадии, когда отсутствует или имеется незначительный отек тканей и болевой симптом не выражен. Если есть сопутствующие заболевания, такие как сахарный диабет, нарушения со стороны иммуносистемы, то рисковать не стоит. Во избежание осложнений при первых признаках болезни необходимо обратиться к врачу.

Подногтевой панариций

Лечение в домашней обстановке народными способами: ванночками, мазями, примочками, антибиотиками не проводится, поскольку не дает эффекта. Если вовремя не прибегнуть к помощи хирурга, есть риск осложнения – поражается кость фаланги.

Сухожильный панариций

Терапию народными способами проводить нельзя, возможны многочисленные осложнения.

Околоногтевой панариций

Исключительно при поверхностной форме допускается проведение лечения дома.

Суставной панариций

Терапия в домашней обстановке не проводится, не дает эффекта.

Костный панариций

Лечение только хирургическое. Народные средства и даже консервативная терапия неэффективны, могут привести ко многим осложнениям.

Панариций пальцев ног

Лечение одинаковое, как и у пальцев рук, зависит от вида панариция.

Исключительно подкожный, околоногтевой поверхностный и кожный панариций возможно лечить в домашней обстановке с применением народных средств и то лишь на первых стадиях заболевания. Если к лечению приступить своевременно, можно избежать оперативного вмешательства. Но при прогрессировании процесса необходимо срочно обратиться к хирургу.

Мази:

  • Мазь Вишневского – одно из наиболее эффективных средств. Хороший антисептик, способствующий быстрому блокированию воспаления и вскрытию гнойника. Мазь наносится на марлевую салфетку, прикладывается к пораженному месту, фиксируется повязкой. Менять достаточно 2 раза в сутки.
  • Ихтиоловая мазь. Аппликация наносится на больной участок и фиксируется повязкой. Можно менять до 3 раз в сутки. Оказывает противовоспалительный эффект и способствует выходу гнойной субстанции.
  • Мазь левомеколь. Перед применением мази, больной палец опускается в ванночку с умеренно горячей водой для улучшения кровоснабжения пораженного участка. После этого делается компресс с левомеколем. Мазь способствует уничтожению патогенной флоры, очищению тканей от гнойной субстанции и их регенерации. Менять компресс 2 раза в сутки. Мазь можно применять и после вскрытия панариция до полного выздоровления.
  • Димексид. Раствор использовать осторожно во избежание химического ожога. Разводится кипяченой водой в пропорции 1:4, в растворе мочится марлевый тампон и делается аппликация на пораженный участок. Марля прикрывается полиэтиленовой пленкой, сверху ватным тампоном и фиксируется. Компресс накладывается не более чем на 40 минут.

Следующие средства можно применять при кожном, околоногтевом, подкожном и подногтевом видах панариция.

  • Фурацилин. Можно применять готовый раствор или самостоятельно растворить таблетку фурацилина в 100 гр горячей воды. Палец держать в растворе чуть выше комнатной температуры 30-40 минут.
  • Тетрациклиновая мазь. Смазывать пораженную область 3-4 раза в сутки, чередуя с цинковой пастой.

Указанные препараты эффективны только на начальных стадиях заболевания, когда присутствует незначительное воспаление без нагноения кожного и подкожного видов.

Если терапия вышеперечисленными препаратами не оказывает положительного эффекта и болезнь прогрессирует, необходимо обратиться к врачу за помощью, чтобы процесс не перешел на глубинные ткани.

Ванночки:

  • один стакан воды с щепоткой медного купороса (длительность процедуры 15 минут);
  • с содой (1 ч. ложка), марганцовкой (на кончике ножа) и морской или пищевой солью (1 ст. ложка) на один стакан воды (длительность 15-20 мин.);
  • с лекарственными травами (спиртовые настойки календулы, эвкалипта, прополиса, грецкого ореха) 2 ч. ложки на 1000 мл воды, длительность 10-15 минут;
  • с содой (1 ч. ложка) и хозяйственным мылом (1 ч. ложка) на стакан воды (длительность 30-40 минут);
  • с чистотелом (1 ст. ложка) на 0,5 литра кипятка. Закипятить и остудить до комфортной температуры. В полученном отваре держать воспаленный палец 20-30 минут;
  • с травой эвкалипта (2 ч. ложки) на 0,5 л воды. Кипятить в течение 10 минут, остудить до комнатной температуры. Ванночку принимать 2-3 раза в сутки по 15-20 минут;
  • измельчить головку чеснока и залить 1 стаканом горячей (около 80°С) воды, дать настояться 5 минут, после этого погрузить палец в полученный раствор на несколько секунд, когда раствор остынет можно продолжать процедуру до остывания воды;

Процедуры проводят при температуре воды 65°С, не больше, в течение 15-40 минут, 2-3 раза в сутки.

Компрессы и примочки

  • Горячие компрессы из молодых листьев грецкого ореха. Одну часть листьев заварить в двух частях кипятка. Отвар настоять и использовать в течение суток в виде горячих компрессов.
  • Сочевник весенний. Траву в свежем виде растереть до состояния кашицы, приложить к воспаленному участку на 20-25 минут до высыхания травы.
  • Пасту, сделанную из листьев цикория можно применять как компресс на 12 часов.
  • Касторовое масло подогреть на водяной бане, смочить марлевую салфетку и приложить на воспаленную область, прикрыть целлофаном и утеплить. Держать до 2 часов.
  • Выжать сок каланхоэ, и протирать больной палец каждый день. На всю ночь приложить к больному месту разрезанный лист.
  • лист алоэ освободить от колючек, разрезать пополам продольно и приложить к воспаленному участку на ночь. Днем смачивать палец соком алоэ.
  • Сделать отвар ромашки, коры дуба и использовать полученный раствор как компресс.
  • Болотный аир почистить и размельчить. Корни аира и вода 1:3 — приготовить отвар и использовать как примочки и компрессы.
  • Потереть на терке свеклу и выжать сок. Использовать как примочки, компрессы.
  • Смешать кашицу из натертого лука и чеснока, использовать в виде компресса.
  • Взять в равных пропорциях: лист капусты, мед и стружку хозяйственного мыла. Приложить к пораженному месту на ночь, сверху прикрыть полиэтиленом и утеплить.
  • Мякоть ржаного хлеба смочить водой до консистенции лепешки, прикладывать к пораженному месту.

Панариций у ребенка

Большинство травм дети получают на улице, где превалирует агрессивная патогенная флора. Кожа ребенка нежная и тонкая, легко травмируется, а иммунная система не всегда справляется с болезнетворными микроорганизмами.

Если у ребенка появилось нагноение необходимо срочно проконсультироваться с детским врачом. На ранних стадиях, при появлении первых симптомов можно ограничиться консервативным лечением. Но ввиду того, что заболевание прогрессирует очень быстро, самолечение может обернуться серьезными осложнениями и упущенным временем. Если панариций достигнет костной ткани, грозит ампутация пальца.

Возможно, детский хирург позволит применение народных средств, как дополнение к основному методу лечения и под постоянным наблюдением.

Профилактика панариция

Профилактика болезни заключается в своевременной обработке полученных травматических повреждений кожных покровов.

Прежде всего, необходимо:

  • тщательно вымыть руки с мылом;
  • извлечь инородные тела из раны, если таковые имеются;
  • по возможности выдавить кровь из раны;
  • обработать раневую поверхность 3% раствором перекиси водорода или 0,05% раствором хлоргексидина водного;
  • обработать рану 1% раствором бриллиантовой зелени или 5% раствором йода;
  • наложить асептическую повязку или наклеить бактерицидный пластырь.

Во время проведения процедуры маникюра, необходимо избегать повреждений кожи. Перед началом манипуляции лучше обработать поверхности кутикулы и прилегающих к ней кожных слоев спиртом. Инструменты для маникюра тоже следует погрузить на 10 минут в спирт. Если кожа все-таки была повреждена, ее необходимо обработать после маникюра этиловым спиртом и избегать попадания в ранки загрязнений.

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов – анализ крови, который направлен на определение резервных возможностей нейтрофилов и моноцитов к выполнению их основной функции – поглощению и переработке чужеродных агентов. Тест выполняется в комплексе иммунограммы. Он показан пациентам с рецидивирующими и хроническими инфекциями, приобретенными и генетическими иммунодефицитными состояниями, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, перенесшим сложные операции, в том числе по трансплантации органов. Анализу подвергается цельная кровь. Исследование основано на оценке фагоцитоза бактерий с флуоресцентными метками. В норме фагоцитирующие гранулоциты составляют от 82 до 90% от общего количества, фагоцитирующие моноциты – от 75 до 85%. Готовность результатов – до 8 дней.

Фагоцитарная активность лейкоцитов – лабораторный показатель, который отражает процент нейтрофилов и моноцитов, способных к связыванию с патогенной микрофлорой и ее перевариванию. Фагоциты – клетки, которые защищают организм от развития инфекций. Они считаются компонентом врожденного иммунитета, в крови представлены двумя видами лейкоцитов – моноцитами и нейтрофилами. Моноциты являются крупными клетками – макрофагами. Они обладают выраженной способностью к поглощению, перерабатывают большие по размерам клетки и органические соединения. В месте воспаления они фагоцитируют бактерии, лейкоцитарную массу, пораженные клетки. В результате ткани очищаются и подготавливаются к регенерации. Нейтрофилы относятся к микрофагам, в отличие от моноцитов поглощают только небольшие клетки и органические компоненты. После переработки агентов нейтрофилы гибнут, высвобождают вещества, которые повреждают бактерии и грибки, усиливают приток иммунных клеток к очагу воспаления.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов позволяет оценить резерв моноцитов и нейтрофилов к перевариванию чужеродных агентов. Изменение характеристик фагоцитов отражает не только иммунологическую реактивность организма, но и особенности некоторых других процессов – белкового и углеводного обмена, наличие интоксикации и истощения организма, активность восстановления после заболеваний и т. д. Таки образом, анализ применяется не только в иммунологии и инфекционистике, но и в ревматологии, онкологии, хирургии. Результаты исследования отображаются как процент активных фагоцитов к их общему количеству. Выявление активных нейтрофилов и моноцитов производится с помощью бактерий с флуоресцентными метками. Биоматериалом для исследования является цельная кровь с гепарином.

Показания

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов показано при подозрении на врожденный или приобретенный иммунодефицит. Оно назначается при затяжных, хронических и рецидивирующих инфекционных заболеваниях – характерном признаке снижения иммунитета. Чаще всего на анализ направляются пациенты с пневмонией, синуситом, отитом, энтероколитом, кандидозом, циститом. Также о недостаточности иммунной защиты могут свидетельствовать длительно незаживающие раны, осложнения после операций. Поэтому анализ выполняется при подготовке к хирургическому вмешательству и при осложненном течении послеоперационного периода, при длительном восстановлении после травм и ожогов. К другим показаниям для данного исследования относятся аллергические, аутоиммунные и онкологические заболевания. Результаты позволяют оценить активность иммунной защиты (фагоцитоза) и ее роль в развитии болезни.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов дает возможность определить фактическую готовность организма к противостоянию инфекциям. Однако стоит помнить, что этот показатель изменяется под влиянием многих факторов. Так, активность моноцитов и нейтрофилов снижается после физической нагрузки и при умственном утомлении, а после приема калорийной пищи повышается. Еще одним ограничением анализа является то, что процедура исследования занимает до 8 рабочих дней, полученные результаты отражают состояние недельной давности.

Подготовка к анализу и забор материала

Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов производится забор крови из вены. За день до анализа нужно исключить из рациона алкоголь, отменить спортивные тренировки и другие интенсивные физические нагрузки, избегать стрессовых ситуаций. Также необходимо проконсультироваться с врачом о влиянии принимаемых лекарств на результат исследования, возможно, некоторые препараты будут временно отменены. Процедура забора крови, как правило, производится с утра, после ночного периода голодания или через 4 часа после приема пищи.

Кровь берется из локтевой вены с помощью пункции, для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов чаще всего используется метод оценки фагоцитоза бактерий с флуоресцентной меткой. Из крови путем центрифугирования и отмывания выделяют моноциты и нейтрофилы – исследуемый материал. Затем в образец вводят культуру люминесцентных бактерий, смесь ресуспендируют и инкубируют, по интенсивности люминесценции определяют количество лейкоцитов, фагоцитировавших бактерии. Результаты анализа подготавливаются в течение 7-8 рабочих дней. Фагоцитарная активность моноцитов и нейтрофилов может быть определена и другими методами, например, окрашиванием фагоцитировавших клеток (метод Романовского-Гимзы), по активности лизосомальных ферментов, производству цитокинов, присутствию катионных белков.

Нормальные значения

Результат анализа крови на фагоцитарную активность лейкоцитов выражается в процентах фагоцитирующих клеток от их общего количества. Значения нормы для гранулоцитов – от 82 до 90%, для моноцитов – от 75 до 85%. Эти показатели одинаковы для пациентов всех возрастов и обоих полов. Физиологическое снижение фагоцитоза может определяться во время беременности, после физической нагрузки, не соответствующей уровню подготовки, и после эмоционального стресса.

Повышение и снижение показателя

Повышение фагоцитарной активности лейкоцитов не имеет диагностической значимости, причиной могут стать острые инфекции. Активность моноцитов и нейтрофилов увеличивается относительно исходного уровня.

Анализ фагоцитарной активности лейкоцитов относится к иммунологическим методам исследования. Его показатели позволяют определить резервные способности клеток крови к поглощению и перевариванию инфекционных агентов, то есть готовность организма противостоять развитию заболевания. Если результаты анализа ниже нормы, необходимо проконсультироваться с лечащим врачом – иммунологом, инфекционистом, хирургом, ревматологом, онкологом. Физиологическое снижение показателей можно скорректировать правильным подбором физической нагрузки, профилактикой стресса.

Реакция фагоцитоза – в основе лежит опсонизация возбудителя.

Из крови выделяют фракцию фагоцитов, к ним добавляют гонококков и сыворотку обследуемого больного (Ат + С). Через определённое время мазки просматривают и подсчитывают не менее 100 фагоцитов. Из них определяют % ##, захвативших микробов. В N ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ=40-80%.

ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО – подсчитывают число захваченных микробных клеток, суммируют и делят на кол-во фагоцитов, получают число микробных ##, поглощённых одним фагоцитом. В N ФЧ=1-5.

12. Органы и клетки иммунной системы.

ИММУННАЯ СИСТЕМА – обеспечивает специ­фическую защиту организма от генетически чужеродных молекул и клеток, в том числе от инфекционных агентов. Включает органы (центральные и периферические), ## и сосуды (переносят иммунокомпетентные ##).

К центральным органам отно­сятся костный мозг и тимус, в которых происходят пролиферация и дифференцировка иммунокомпетентных клеток: Т- и В-лимфоцитов (под влияние гормонов и микроокружения).

Периферические лимфоидные органы – скопления лимфоидной ткани под слизистыми оболочками ЖКТ, дыхательного и мочеполового трактов (групповые лимфатические фолликулы, миндалины и др.), лимфатические узлы и селезенка. В них происходят пролиферация и диф­ференцировка лимфоцитов под влиянием Аг, поступившего в организм.

Клетки иммунной системы:

1) Т-тимфоциты (тимусзависимые) – созревают в тимусе, отвечают за клеточный и частично за гуморальный иммунитет.

2) В-лимфоциты (bursa-зависимые) – отвечают за гуморальный иммунитет, за выработку Ig.

3) Тканевой макрофаг – захватывает и перерабатывает Аг, затем передаёт информацию о нём на лимфоциты.

4) Естественные киллеры – контактируют с чужеродными ## (Б!!, опухолевые, заражённые В!!) и убивают их (лизируют)

5) Большие гранулярные лимфоциты.

6) Дендритные ## – отвечают за связывание и хранение Аг информации.

7) Вспомогательные клетки: нейтрофилы, тучные ##, базофилы, эозинофилы, тромбоциты, эритроциты.

13. Т-клетки.

Т-ЛИМФОЦИТЫ в процессе дифференцировки и пролиферации образуют 4 субпопуляции, отличающиеся по своим функциям.

Т-хелперы, или помощники (to help), и Т-супрессоры, или ингибиторы (to suppress) выполняют регуляторные функции. Т-хелперы узнают детерминантные группы АГ на мембране макрофага и активируют при помощи медиаторов В-лимфоциты и Т-лимфоциты-эффекторы. Т-супрессоры угнетают Т-хелперы, В-лимфоциты или плазмати­ческие клетки Þ задерживают синтез антител.

К Т-лимфоцитам-эффекторам относятся цитотоксические клетки Т-киллеры (to kill) и Т-эффекторы, продуцирующие лимфокины . Основная функция цитотоксических Т-киллеров – уничтожать клетки-«мишени», несущие соответствующий чужеродный АГ. Т-эффекторы обеспечивают клеточный специфический иммунитет, участвуют в формировании реакции ГЗТ.

РЕЦЕПТОРЫ В- и Т-лимфоцитов (как и АТ) являются антигенраспознающими молекулами иммунной системы. Они способны узнавать только одну определенную моле­кулярную структуру детерминантной группы АГ (эпитопа).

Рецепторы В-лимфоцитов представляют собой антигенсвязывающие участки молекул Ig, кото­рые синтезируются данным В-лимфоцитом и частично остаются в составе его мембраны. Они фиксируются при помощи так назы­ваемого «якорного» сегмента иммуноглобулина (Fc-конец).

Рецепторы Т-лимфоцитов структурно похожи на Ig – это белки, состоящие из двух субъединиц – α- и β-, расположенных на поверхности Т-лимфоцита. Антигенсвязывающий участок в молекуле рецептора Т-лимфоцита образован гипервариабельными участками полипептидных цепей, напоминающими аналогичные участки Ig, между которыми образуется полость.

Как уже отмечалось, рецепторы В- и Т-лимфоцитов узнают антигены одним и тем же спо­собом, но узнавание происходит в разных условиях. В-лимфоциты спо­собны узнавать и реагировать на СВОБОДНЫЙ АГ, цирку­лирующий в кровяном русле, в то время как Т-лимфоциты узнают и активируются только тем АГ, детерминантные группы которого представлены НА МЕМБРАНЕ МАКРОФАГОВ. В обоих случаях при взаимодействии с антиге­нами участвуют белки главного комплекса гистосовместимости HLA, являющиеся маркерами индивидуальности каждого ор­ганизма. Например, Т-хелперы распознают АГ только в том случае, если он связан с белками МНС II на поверхности макрофагов. Т-киллеры взаимодействуют с чужеродными АГ, находящимися на поверхности клеток-«мишеней» в окружении антигенов МНС I. Тканевые антигены МНС I, введенные в организм реципиента при пересадках каких-либо органов донора (почки, сердце и др.), становятся «мишенями» для Т-киллеров. В этом случае Т-киллеры напрямую «атакуют» чужеродную ткань, в ре­зультате чего происходит отторжение трансплантата. Вместе с этим Т-киллеры защищают организм от вирусной инфекции, т.к. при размножении вируса в клетке его АГ могут встраи­ваться в # мембрану. Приобретение клеткой вирусных антигенов наряду с имеющимися у нее маркерами – белками МНС I, делает ее «мишенью» для Т-килле­ров, которые уничтожают зараженную вирусом клетку.

14. В- клетки.

В-ЛИМФОЦИТЫ. Основной их функцией является синтез Ig, который начинается после созре­вания в плазматические ##. СТИМУЛОМ для пролифе­рации является связывание эпитопов АГ с гомологичными рецепторами на мембране. В результате образуется иммунологически одно­родный клон клеток, снабженных идентичными Ig рецепторами. Затем под влиянием медиа­торов происходит дифференцировка с образованием клеток иммунологической памяти и клеток, продуцирующих АТ.

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В ГИПОТОНИЧЕСКИХ СРЕДАХ В ПРИСУТСТВИИ АНТИБИОТИКОВ

PHAGOCYTIC ACTIVITY OF NEUTROPHILS OF HUMAN BLOOD IN HYPOTONIC MEDIUM BY ANTIBIOTIC ACTION

А.А. Мищенко, Э.М. Савельева

A.A. Mischenko, E.M. Savelyeva

Исследована фагоцитарная активность нейтрофилов крови человека в гипотонической среде и в присутствии ряда антибиотиков. Снижение тоничности в 1.5 -2.0 раза вызывает увеличение параметров фагоцитоза на 16%. В присутствии фуросемида действие гипотонии не проявляется. Различные антибиотики вызывают сильное ингибирование фагоцитоза.

Phagocytic reaction of human neutrophils in the hypotonic medium and at presence of antibiotics was investigated. Tonicity decrease of medium in 1.5 - 2 times causes increase of phagocytosis parameters on 16 %. At furosemide presence action of a hypotonia is not shown. Various antibiotics caused strong inhibition of phagocytosis.

Ключевые слова: нейтрофил, фагоцитоз, фагоцитарная активность, гипотония.

Key words: neutrophil, phagocytosis, phagocytic activity, hypotonycity.

Введение

Основным барьером на пути проникновения инфекции в организм служат слизистые оболочки. Будучи многокомпонентными системами, они принимают участие во многих реакциях организма, в том числе в иммунных. В норме в слизистой оболочке содержатся иммуноглобулины и небольшое количество нейтрофилов и макрофагов . Именно эти клетки первыми контактируют с патогенами, в случае же проникновения последних в толщу тканей барьером становятся лимфоидные скопления в толще слизистых.

Поскольку поверхности слизистых оболочек не изотоничны плазме крови, для оценки функционирования клеток иммунной системы в таких условиях целесообразно провести эксперименты в анизотоничной среде in vitro. Так, показано, что в гипотонических растворах в лейкоцитах активируется кислородный взрыв, метаболизм арахидоновой кислоты, увеличивается концентрация ионов кальция . В нашей работе проведены исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крови при моделировании гипотонических условий. Поскольку в случае воспалительного процесса в организме врачами часто назначается антибиотиковая терапия, исследовано также действие антибиотиков различных классов на фагоцитарную активность нейтрофилов крови.

Объекты и методы

В экспериментах использована венозная кровь мужчин доноров, полученная из Республиканской станции переливания крови (г. Сыктывкар). По 500 мкл крови помещали в лунки планшета для иммунологических реакций. В каждую лунку добавляли суспензию дрожжевых клеток (ООО «саф-Нева»), предварительно отмытых трижды 0.9% раствором NaCl. Количество дрожжевых клеток в среднем составляло 30 тыс./1 мкл крови.

Для снижения тоничности в 2.0 и 1.5 раза в лунки добавляли дистиллированную воду (рН 7.4). В ряде экспериментов в лунки с изо- и гипотонической средами добавляли также фуросемид в концентрации 1*10-5 Моль/л.

В экспериментах с антибиотиками в лунки добавляли линкомицин, цефтриаксон, амоксиклав и гентамицин в концентрации 30 мг/л.

Пробы инкубировали в термостате при 370С в течение 20 мин. Затем планшет помещали на лед для остановки реакции фагоцитоза и с каждой лунки готовили по 3 мазка. После просушивания и фиксации мазки окрашивали по Гимза-Романовскому, просматривали под микроскопом при иммерсионном увеличении 15*90.

Подсчитывали: 1) фагоцитарную активность - количество активных нейтрофилов из 100 встреченных при просмотре; 2) фагоцитарный индекс -среднее количество дрожжевых клеток, поглощенных одним нейтрофилом. Результаты обработаны метолом парных сравнений, достоверность различий между выборками оценивали по критерию Вилкоксона .

Результаты и обсуждение

В контроле фагоцитарная активность лейкоцитов человеческой крови составила 49.5±5%, фагоцитарный индекс - 1.64±0.1(n=20). Данные согласуются с результатами, полученными при изучении фагоцитоза патогенной Candida crusei . Фагоцитарная активность нейтрофилов в данных условиях стимулируется Р-глюканами в клеточной стенке дрожжей, к которым на поверхности фагоцитов имеются рецепторы , а также опсонизирующим эффектом имеющихся в плазме крови компонентов системы комплемента C3bi и иммуноглобулинов IgG .

При снижении тоничности среды в 1.5 и 2.0 раза (n=20) фагоцитарная активность увеличилась в среднем на 16.5%, составив 58.1±9.1% (p<0.05). Увеличился также фагоцитарный индекс до 1.97±0.06 и 2.14±0.58 при снижении тоничности в 1.5 и 2.0 раза соответственно. Таким образом, гипотония вызвала активацию фагоцитоза, что отразилось в увеличении как доли активных клеток, так и скорости поглощения фагоцитами дрожжей. Одним из механизмов такого

действия гипотонии может быть увеличение концентрации внутриклеточного кальция , в результате чего изменяется цитоскелет клеток, их подвижность и фагоцитарная активность. Кроме того, активность клеток в этих условиях может меняться в результате запуска реакции регуляторного уменьшения объема, RVD, в ответ на набухание клеток . С целью исключить влияние последнего было проведено ингибирование фуросемидом K+,Cl" - котранспорта, активация которого приводит к RVD. Поскольку вещество меняет хемотаксическую активность клеток , предварительно было исследовано его влияние в изотонической среде. При этом фуросемид не изменял фагоцитарную активность нейтрофилов (n=20), что согласуется с опубликованными данными . На фоне гипотонической среды фуросемид не изменял фагоцитарную активность по сравнению с контролем и снижал ее по сравнению с результатами в гипотонической среде в отсутствие вещества (p<0.05). В частности, в присутствии фуросемида фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс составили 45.9±6.7%; 1.83±0.1 и 50.5±5.6%; 1.7±0.1 соответственно при

гипотонии 1.5 и 2.0. Следовательно, блокируя реакцию RVD, фуросемид тем самым предотвращал активацию клеток в условиях гипотонии.

Под действием антибиотиков показатели фагоцитарной активности снизились. При действии цефтриаксона фагоцитарная активность снизилась на 78% до 10±2.3 % (р<0.02), амоксиклав - на 70% до 17±3.9% (р<0.02), линкомицин - на 65% до 16±4.9% (р<0.02), гентамицин - на 76% до 11±3.6% (р<0.02). Фагоцитарный индекс в экспериментах с антибиотиками практически оставался неизменным, следовательно, данные препараты не влияют на скорость поглощения клеток.

Повышение фагоцитарной активности под влиянием антибиотиков отмечено в ряде работ . Согласно другим данным, фагоцитарная активность лейкоцитов подавляется при действии таких антибиотиков, как ауреомицин . Окситстрациклин, эритромицин, хлорамфеникол, полимиксин В не вызывают заметных изменений фагоцитарной активности лейкоцитов .

Используемые в опытах антибиотики по действию относятся к разным группам. Амоксиклав и цефтриаксон действуют как бактерицидные препараты (ингибируют развитие клеточной стенки, причем подавляют синтез специфического для клеточной стенки бактерий пептидогликана - муреина). Линкомицин и гентамицин при низких концентрациях действуют как бактериостатики и бактерицидно - при увеличении концентрации (ингибируют синтез белка за счет связывания с 50s и 30 s субъединицами рибосомы). Все антибиотики в наших экспериментах оказали ингибирующий эффект на нейтрофилы. Это может быть связано с изменением структуры

антибактериальных препаратов вследствие метаболических процессов в организме, в результате чего продукты метаболизма становятся токсичными для

самих фагоцитов . Антибиотики являются одной из главных причин нейтропении и агранулоцитоза. Данный эффект оказали пенициллины, цефаллоспорины и сульфаниламиды . Аминогликозид гентамицин увеличивает образование лизосом, содержащих различные факторы вирулентности . Представители Р-лактамных антибиотиков, амоксиклав и цефтриаксон, могут подавлять реакцию окислительного взрыва .

Данные о действии линкозаминов, к которым относится используемый линкомицин, на фагоцитарную активность противоречивы . При разных концентрациях препарата авторы отмечают как повышение фагоцитарной активности, так и ее снижение либо отсутствие изменений. Возможно, используемая в наших экспериментах концентрация антибиотиков была токсичной для клеток.

1. В контроле фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс составили соответственно 49.5±5% и 1.64±0.1.

2. Замена изотоничной среды на гипотоничную вызывает увеличение как фагоцитарной активности, так и фагоцитарного индекса соответственно на 16.5 % и в 1.5-2 раза.

3. В присутствии фуросемида действие гипотонии на фагоцитарную активность нейтрофилов не проявляется.

4. Антибиотики цефтриаксон, амоксиклав, линкомицин и гентамицин вызывают ингибирование фагоциратной активности нейтрофилов на 78%, 76%, 65 % и 70% соответственно.

1. Алешина Е.Н. Изучение действия аморфного и кристаллического пени-циллинов на чумной микроб // Тр. Ростовского-на-Дону ПЧИ. Ростов-на-Дону, 1959. Т. 15. Вып. 1. С. 153-160.

2. Арефьева Н.А., Азнабаева Л.Ф. Иммунные реакции слизистой оболочки носа: цитологическая диагностика, методы лечения // Consilium Medicum. 2009. Т. 11. №11. С. 30-33.

3. Израэльсон М.И., Шполянский Б.И., Боевская Г.И. Влияние пенициллина на функциональную способность ретикуло-эндотелиальной системы и фагоцитарную активность лейкоцитов // Журн. микр. эпид. и иммун. 1951. № 3. С. 59-62.

4. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. школа, 1980. 291 с.

5. Финкель Е.А., Луцкая С.И. Аутовакцинотерапия при туберкулезе: Монография. Кыргызстан, 1972. 154 с.

6. Bazzoni F., Cassatella M.A., Laudanna C., Rossi F. Phagocytosis of opsonized yeast nduces tumor necrosis factor - alpha mRNA accumulation and protein release by human polymorphnonuclear leucocytes // J. Leukoc. Biol. 1991. V. 50. № 3. P. 223-228.

7. Czop J.K., Valiante N.H., Janusz M.J. Phagocytosis of particulate activators of the human alternative complement pathway thought monocyte beta-glucan receptors // Prog. Biol. Res. 1989. V. 297. P. 287-296.

8. De Weck A.L. Pharmacologic and immunochemical mechanisms of drug hypersensitivity // Immunol Allergy Clin North Am. 1991. № 11. Р. 461-474.

9. Gilliland B.C. Drug-induced autoimmune and hematologic disorders // Immunol Allergy Clin North Am. 1991. № 11. Р. 525-553.

10. Hiura M., Ozawa M., Othsuka T. a. o. Stimulation of superoxide anion production in guinea pig polimorphonuclear leucocytes by hypotonic condition with protein kinase C activators // Arch. Biochem. Biophys. 1991. C. 15. № 291. P. 31-37.

11. Kishi K., Hirai K., Hiramatsu K., Yamasaki T., Nasu M. Clindamycin suppresses endotoxin released by ceftazidime-treated Escherichia coli O55: B5 and subsequent production of tumor necrosis factor alpha and interleukin-1 beta // Antimicrob Agents Chemother. 1999. V. 43. № 3. Р. 616-22.

12. Kovaks T., Stas I. et al. Volume regulatory mechanisms of human granulocytes in hipoosmotic media // Acta Biochim. Biophys. Hung. 1989. V. 24, № 1-2. P. 142-147.

13. De Weck A.L. Pharmacologic and immunochemical mechanisms of drug hypersensitivity // Immunol Allergy Clin North Am. 1991. № 11. Р. 461-474.

14. Labro M.T. Pharmacology of spiramycin in comparison with other macrolides // Drug Invest 1993. 6. Suppl 1. Р. 15-28.

15. Lachani M., Usmani S. et al. In vitro effect of furosemideon hemiluminescence of polymorphonuclear neutrophils in preterm infants // Biol.Neonate. 1997. V. 72. № 3. P. 142147.

16. Muniz-Junqueira MI, Mota LM, Aires RB, Junqueira LF Jr. Digitalis inhibits and furosemide does not change the in vitro phagocytic function of neutrophils of healthy subjects // Int Immunopharmacol. 2003. V. 3. № 10-11. P. 1439-1445.

17. Munoz J., Geister R. Inhibition of phagocytosis by aureomycin // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1950. V. 75. № 2. Р. 367-370.

18. Richardson M.D., Donaldson F. Interaction of Candida crusei with human neutrophils in vitro // J. Med. Microbiol. 1994. V. 41, № 6. P. 380-388.

19. Vetvica V., Thornton B.P., Ross C.P. Soluble beta-glucan polysaccharide binding to the lectin site of neutrophil or natural killer cell complement receptor type 3 (CD 11b/CD 18) generates aprimed state of receptor capable of mediating citotoxicity of IC3b - opsonized target cells // J. Clin. Invest. 1996. V. 98. P. 50-61.

Принцип метода. Некоторые клетки белой крови (гранулоциты и в меньшей степени моноциты) способны in vitro и in vivo поглощать, а часто и разрушать чужеродные частицы с помощью своих ферментов. Причем сам процесс проходит несколько стадий, которые включают хемотаксис, фагоцитоз, разрушение микробов и переваривание поглощенных веществ. При повторном контакте или специфической иммунизации клетки опсонируются, т. е. эта способность усиливается. Разработано большое число методик определения фагоцитарной активности клеток крови. Для этих целей используют определенную тест-систему (конкретный вид микробов, зимозан). В одних случаях реакцию проводят в пробирках или чашках Петри на агаре, а в других - внутри организма животного (внутрисосудисто, интраперитенально или методом «окошка рога»).
Ход определения.
1. Приготовление тест-системы: микробная взвесь с содержанием 1-2 млрд тел в 1 мл по оптическому стандарту.
2. Смешивание 2%-ного раствора лимоннокислого натрия, крови и микробной взвеси в соотношении 1:2:1 и термостатирование 30 мин при температуре 40,5 °С.
3. Центрифугирование при 1500 об/мни 10 мин и приготовление мазков на предметных стеклах из верхнего слоя осадка и на агаре в чашках Петри.
4. Фиксация препаратов метиловым спиртом в течение 3-5 мин и окраска по Романовскому - Гимза в течение 10-15 мин.
5. Учет реакции. В окрашенных мазках под микроскопом (увеличите 90x7) подсчитывают 100 нейтрофилов или моноцитов, содержащих или нет микробов, учитывая количество микробов в клетке и степень их окраски (переваривание). Высчитывают процент фагоцитированных клеток - показатель активности, и среднее число микробов па один фагоцит - фагоцитарный индекс; отношение числа переваренных микробов к общему числу фагоцитированных клеток дает процент переваривания, а среднее их число на один фагоцит дает индекс переваривания.
Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза. Для этого определяют отношение процента фагоцитоза, полученного через 30 мин инкубации, к проценту фагоцитоза через 2 ч и отношение фагоцитарных индексов. Принято считать, что если индекс завершенности фагоцитоза больше 1, то фагоцитоз завершенный, если меньше - то незавершенный. Для оценки степени повышения фагоцитозной активности лейкоцитов при специфической иммунизации высчитывают опсонофагоцитарный индекс по отношению фагоцитарных чисел у иммунизированных и контрольных животных. У новорожденных животных целесообразно вычислить элиминирующую способность лейкоцитов крови по абсолютному числу фагоцитированных микробов всеми фагоцитами, содержащимися в 1 мкл крови, т. е. получить абсолютные показатели.